按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品；溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心，徹底收集粉末；確保標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解和混勻（大約10min），然后再進(jìn)行后續(xù)的系列稀釋步驟，確保每一步都充分混勻且精確移液；顯色的恰當(dāng)終止；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

請按照試劑盒說明書上的介紹稀釋標(biāo)準(zhǔn)品并檢測，標(biāo)曲的擬合可以用Excel，添加散點圖并用多項式擬合。我們推薦使用專業(yè)軟件和四參數(shù)方法擬合，更為準(zhǔn)確。判讀標(biāo)準(zhǔn)主要是看標(biāo)曲的線性，其中R2要達(dá)到0.99%以上。

ELISA檢測實驗中的標(biāo)準(zhǔn)曲線必須做；如果不做標(biāo)曲只做樣品檢測，則既不能判斷結(jié)果是否成立，又無法計算樣品數(shù)值；每次檢測必須單獨做標(biāo)準(zhǔn)品檢測并擬合標(biāo)曲，之前的標(biāo)曲即使是同一試劑盒的也不能使用；

柱子需要充分56℃干燥——徹底干燥去除乙醇，對下游酶促反應(yīng)很關(guān)鍵；樣品雜質(zhì)過多——實驗前將樣品于16,000×g離心10分鐘，取離心后的上清樣本，把樣品中多余的雜質(zhì)去除。

樣品保存不當(dāng)——血液樣品發(fā)生溶血，減少樣品用量；樣品雜質(zhì)過多——實驗前將樣品于16,000×g離心10分鐘，取離心后的上清樣本，把樣品中多余的雜質(zhì)去除；Proteinase K 活性下降——重新制備Proteinase K，使用后Proteinase K 必須保存于-20℃，Proteinase K 與Buffer ACL 不能預(yù)先混合；樣品裂解不充分——樣品與Buffer ACL 混勻不充分，重新提取，加入Buffer ACL 后先顛倒混勻3~5次，然后以最高速度渦旋讓樣。

①走私血清缺乏檢驗檢疫監(jiān)管，冷鏈運(yùn)輸無法保障，嚴(yán)重影響血清批內(nèi)和批間穩(wěn)定性，實驗數(shù)據(jù)結(jié)果不可控；②正規(guī)的血清來源于中華人民共和國海關(guān)總署允許進(jìn)口的非疫區(qū)國家，而很多走私的血清往往來自發(fā)生過疫情的國家。未經(jīng)檢疫的血液制品中可能攜帶傳染性物質(zhì)，一旦流入境內(nèi)，可能會對試者和研究人員的生命健康造成威脅。

FBS中的絮狀物可能由很多種原因造成，其中最常見的沉淀主要成分是纖維蛋白和脂蛋白，不會影響血清品質(zhì)，沉淀若需去除，視沉淀大小500-1000×g，離心5-10min去除，也可不做處理。

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否渾濁，然后在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài)，黑點是否游動。如果細(xì)胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養(yǎng)基就會迅速變黃、變渾濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長狀態(tài)良好，與黑點出現(xiàn)前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：①細(xì)胞生長過老，破碎的細(xì)胞殘骸；②配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長；③培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除；④血清等級不足以維持細(xì)胞良好的生長。