請先確認細胞培養(yǎng)實驗方案是否需要對血清進行熱滅活。一般不建議熱滅活,熱滅活處理會損失血清中部分營養(yǎng)成分,并且容易發(fā)生蛋白質聚集沉淀;少數(shù)對補體敏感的實驗需要(如某些免疫學實驗,腺病毒包裝,某些PS培養(yǎng)等),可酌情使用熱滅活血清。熱滅活方法:血清完全解凍充分搖勻后置于56℃水浴中30min,期間不時晃動均勻。
實驗顯示,熱滅活對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活的血清,會增加沉淀產生的概率,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。熱滅活過程中局部溫度過高,搖晃不均勻,滅活時間過長,都會造成血清品質下降。若非必須,可以不需要做熱滅活這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質量!
血清中含有微量的血紅蛋白,與采集血液過程中血細胞的破裂數(shù)目有關,只要血紅蛋白的含量在藥典規(guī)定范圍內,顏色的深淺和血清品質無關,不影響細胞培養(yǎng)。中國藥典規(guī)定血紅蛋白含量≤200mg/L。
所有的ExCell Bio血清都在冰凍狀態(tài)下由干冰運輸,因此您收到時應該仍是冰凍狀態(tài)。如果只是部分解凍,F(xiàn)BS仍然可以使用,但是建議先將FBS在冰箱中充分解凍,之后溫和的搖晃搖勻,再移至-10℃及以下進行儲存。
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在2周內使用它。
建議血清應保存在-10℃及以下。若一次無法用完一瓶,無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?,再放回冷凍。解凍時,建議將血清從冷凍室先移至2-8℃冰箱解凍,再放置于室溫進行徹底解凍。請注意,解凍過程中需要經常搖晃混合。嚴禁將FBS在37℃長時時間孵育解凍。